Equipamentos construídos de forma a colocar o recipiente contendo a amostra em movimento circular uniforme dotado de grande velocidade angular e raio apreciável.
CENTRIFUGAÇÃO
Processo separação em que um solução fluída é submetida a um centrifugador para promover separação dos componentes.
E ocorrerá:
- Sedimentação de sólidos em líquidos.
- Diferença de densidade (somente líquidos).
VANTAGENS:
Sedimentação, decantação. Sólidos, líquidos densidade diferentes.
TIPOS DE CENTRIFUGAÇÃO
SEPARAÇÃO DIFERENTES FASES:
Solução fase sólida + aquosa.
Ex.: Separação membranas celulares, de elementos figurados do sangue.
CENTRIFUGAÇÃO
Processo separação em que um solução fluída é submetida a um centrifugador para promover separação dos componentes.
E ocorrerá:
- Sedimentação de sólidos em líquidos.
- Diferença de densidade (somente líquidos).
VANTAGENS:
Sedimentação, decantação. Sólidos, líquidos densidade diferentes.
TIPOS DE CENTRIFUGAÇÃO
SEPARAÇÃO DIFERENTES FASES:
Solução fase sólida + aquosa.
Ex.: Separação membranas celulares, de elementos figurados do sangue.
CENTRIFUGAÇÃO DIFERENCIAL:
Repetidas centrifugações, aumentando progressivamente a velocidade angular.
Ex.: Partículas mais densas sedimentam primeiro e posteriormente as de menor intensidade.
CENTRIFUGAÇÃO ISOPÍNICA OU DE EQUILÍBRIO
Separação macromoléculas através de gradiente de concentração.
SEPARAÇÃO POR GRADIENTE: Separação gradiente de tamanho, baseia-se no tamanho e massa da partícula para sedimentação. Ex.: separação de proteínas e anticorpos, possuem densidade similares, porém massas diferentes. A separação com base na massa separará as diferentes classes. A densidade da solução da amostra deve ser inferior à menor densidade do gradiente e a extensão do gradiente devem ser suficiente para ocorrer a separação e o tempo deve ser bem dimensionado, pois se for muito extenso, as partículas podem se acumular no fundo do tubo.
SEPARAÇÃO ISOPÍNICA: Uma partícula que possui uma determinada densidade e, que será submetida ao processo de centrifugação. A partícula irá estacionar em uma posição onde a densidade da solução em que se encontra é próxima à densidade da partícula. Uma vez estabelecida a sua posição, o tempo total de centrifugação não irá alterar a migração da partícula. Ex.: separação de ácidos nucléicos em um gradiente de cloreto de césio (CsCl). A densidade da partícula da amostra deve estar dentro dos limites das densidades de gradiente, o tempo deve ser suficiente para que as partículas se unam em seu ponto isopínico.
ULTRACENTRIFUGAÇÃO: Processo de centrifugação sob pressão, permitindo a separação de partículas de modo eficiente, utilizando-se de refrigeração e vácuo de forma a minimizar o atrito com o ar, maior velocidade 500.000g.
TIPOS DE ROTORES:
1-) DE ÂNGULO MÓVEL: Os tubos inseridos em rotores móveis, são mantidos na vertical enquanto o equipamento está em repouso. Ao girar, se posicionam horizontalmente, dependendo da rotação que é aplicada. Observar o tamanho do tubo para não bater e quebrar.
2-) DE ÂNGULO FIXO: Os tubos são posicionados em um ângulo definido. Ao iniciar a operação, o material se reorienta no interior do tubo, conforme a força centrífuga que é aplicada. Mais eficiente que a centrifugação vertical, pois o caminho percorrido pela partícula é menor, utilizada em laboratórios de biotecnologia para separação de bactérias e leveduras. Utiliza-se menor tempo e é eficiente para separação de sólidos floculentos ou finamente divididos. DESVANTAGEM: Em relação a centrifugação vertical é não conseguir realizar a análise de volume de sedimento.
3-) DE ÂNGULO VERTICAL: São adequados para separações isopínicas (de densidade). Ex.: Isolamento de DNA, RNA e lipoproteínas. Tubos graduados e é bastante utilizado para a determinação de volume de sedimentos. DESVANTAGEM: Ocorrência de sedimentação incompleta, pois a partícula tem que atravessar toda a coluna de líquido para chegar ao fundo do tubo. Para corrigir erros, utiliza-se uma rotação maior.
ADAPTADORES PARA CENTRÍFUGAS:
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